Evaluation of different commercial hyaluronic acids as a vehicle for injection of human adipose-derived mesenchymal stem cells / Avaliação de diferentes ácidos hialurônicos comerciais como veículo de injeção para células mesenquimais humanas derivadas do tecido adiposo

ABSTRACT Objective: The main purpose of this study is to evaluate, in vitro, the cytotoxicity of different commercial brands of hyaluronic acids to be used as a vehicle for injection of human adipose-derived mesenchymal stem cells (AD-MSCs). Methods: AD-MSCs were divided into seven groups: one control group where AD-MSCs were cultivated with phosphate-buffered saline (PBS) and six other groups where AD-MSCs were cultivated with different commercial brands of hyaluronic acid. AD-MSC viability analysis was performed after 4, 24, and 48 h in contact with each treatment, using the trypan staining method on a Countess automated cell counter (Thermo Fisher Scientific). Results: The results clearly demonstrated a significant difference in cell viability when AD-MSCs were exposed to different hyaluronic acids when compared with the control group. Conclusion: These data suggest that hyaluronic acid can be used as a vehicle for injection of human AD-MSCs, but caution is needed to choose the best product, aiming at its future therapeutic application.

RESUMO Objetivo: Avaliar in vitro, de forma direta, a citotoxicidade de ácidos hialurônicos como veículo de injeção para linhagens de células-tronco mesenquimais (CTMs) obtidas de tecido adiposo humano. Métodos: As CTMs foram divididas em sete grupos, os quais foram expostos ao ácido hialurônico de seis marcas comerciais, além do contato com tampão fosfato-salino PBS (grupo controle). Após quatro, 24 e 48 horas, foi feita a análise da viabilidade celular através do contador Countess pelo método de coloração com Trypan Blue (Thermo Fisher Scientific). Resultados: Os resultados demonstraram uma diferença significativa na viabilidade celular quando essas linhagens de CTMs foram expostas aos diferentes ácidos hialurônicos em comparação com o grupo controle. Conclusão: Os dados sugerem que o ácido hialurônico pode ser usado como veículo de injeção para CTMs, porém é necessária cautela na escolha do melhor produto para aplicação terapêutica futura.

Genetic analysis and cAMP measurement: comparison between lean and obese anovulating mice / Análise genética e dosagem de AMP cíclico: comparação entre camundongos fêmeas anovuladoras magras e obesas

PURPOSE: To evaluate genes differentially expressed in ovaries from lean (wild type) and obese (ob/ob) female mice and cyclic AMP production in both groups. METHODS: The expression on messenger RNA levels of 84 genes concerning obesity was analyzed through the PCR array, and cyclic AMP was quantified by the enzyme immunoassay method. RESULTS: The most downregulated genes in the Obesity Group included adenylate cyclase-activating polypeptide type 1, somatostatin, apolipoprotein A4, pancreatic colipase, and interleukin-1 beta. The mean decrease in expression levels of these genes was around 96, 40, 9, 4.2 and 3.6-fold, respectively. On the other hand, the most upregulated genes in the Obesity Group were receptor (calcitonin) activity-modifying protein 3, peroxisome proliferator activated receptor alpha, calcitonin receptor, and corticotropin-releasing hormone receptor 1. The increase means in the expression levels of such genes were 2.3, 2.7, 4.8 and 6.3-fold, respectively. The ovarian cyclic AMP production was significantly higher in ob/ob female mice (2,229±52 fMol) compared to the Control Group (1,814±45 fMol). CONCLUSIONS: Obese and anovulatory female mice have reduced reproductive hormone levels and altered ovogenesis. Several genes have their expression levels altered when leptin is absent, especially adenylate cyclase-activating polypeptide type 1. .

OBJETIVO: Avaliar os genes diferencialmente expressos em ovários de camundongos fêmeas magras (tipo selvagem) e obesas (ob/ob) e a produção de AMP cíclico em ambos os grupos. MÉTODOS: A expressão nos níveis de RNA mensageiro de 84 genes relacionados à obesidade foi analisada por PCR Array, e o AMP cíclico foi quantificado por método imunoenzimático. RESULTADOS: Os genes que mais sofreram diminuição da expressão no Grupo Obesidade incluíram o tipo 1 de polipeptídeo ativador da adenilato ciclase, o da somatostatina, da apolipoproteína A4, da colipase pancreática e da beta interleucina 1. A média de redução na expressão desses genes foi de aproximadamente 96, 40, 9, 4,2 e 3,6 vezes, respectivamente. Por outro lado, os genes que mais tiveram aumento na expressão no Grupo Obesidade foram o gene da proteína modificadora da atividade do receptor de calcitonina 3, do proliferador de peroxissomos ativados por proteína alfa, do receptor de calcitonina e do receptor para hormônio liberador de corticotropinas 1. As médias de acréscimo nos níveis de expressão de tais genes foram de 2,3, 2,7, 4,8 e 6,3 vezes, respectivamente. A produção de AMP cíclico ovariana foi significantemente aumentada em camundongos fêmeas ob/ob (2.229±52 fMol) quando comparada ao Grupo Controle (1.814±45 fMol). CONCLUSÕES: Camundongos fêmeas obesas e anovuladoras possuem níveis de hormônio reprodutivo reduzidos e ovulogênese alterada. Vários genes mostram níveis de expressão alterados quando a leptina está ausente, principalmente o tipo 1 de polipeptídeo ativador da adenilato ciclase. .